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Programa de Pós Graduação em Genética
e Melhoramento SEMINÁRIO DE TESE SEQUENCIAMENTO DE MARCADOR SCAR DETECTADO Prelecionista: Jefferson de Brito Marthe Orientadora: ProfªMara Garcia Tavares Co-orientadoras: Profª Silvia das Graças Pompolo e Profª Tânia Maria Fernandes Salomão Data: 26/06/2008 Cromossomos B,
também chamados de cromossomos acessórios ou extranumerários ocorrem
amplamente em várias espécies vegetais, animais e fungicas
(BEUKEBOOM, 1994). Estes cromossomos são considerados dispensáveis
para o ser vivo e seu número varia, podendo chegar a 8
cópias por célula em certos organismos (ROSATO et
al., 1998). No gênero Partamona,
sete espécies já foram caracterizadas citogeneticamente:
P. helleri,
P. pearsoni,
P. vicina,
P. ayaleae,
P. mulata, P. sp. e P. peckolti (BRITO
et al., 2005). Destas, somente P. helleri apresentou cromossomos Bs (COSTA et al., 1992). TOSTA et al. (1999) identificaram um marcador RAPD associado a
cromossomo B, em P. helleri.
Primers SCARs foram desenhados a partir deste marcador RAPD
(TOSTA et al., 1999) e foram utilizados para
amplificar o DNA de outras espécies do gênero Partamona. As análises demonstraram a presença do marcador SCAR em P. cupira, P. criptica (TOSTA, 2005) e em P. rustica
(MARTHE et al., 2007). Posteriormente, este
marcador SCAR foi clonado e seqüenciado (TOSTA et al., 2007). Assim,
este presente trabalho teve como objetivos comparar o nível de identidade das
seqüências SCARs
encontradas nas diversas espécies de Partamona
e verificar se haveria ou
não uma correlação entre esta seqüência e a presença de cromossomos B em uma
das espécies analisadas, P. cupira. Para
a comparação das seqüências foi utilizado como material biológico indivíduos
de colônias de P. cupira, P. criptica e P. rustica oriundos de Guimarânia-MG, Domingos Martinho-ES e Nova Porteirinha-MG respectivamente. O DNA foi extraído
segundo WALDSCHIMDT et al. (1997) e amplificado com
os primers SCARs
(TOSTA et al., 1999). Nas reações de amplificação
foram utilizados dois pares de “primer”: um externo
(para clonagem e sequenciamento) e um interno (para
sequenciamento direto). As seqüências foram
alinhadas e editadas utilizando-se os programas Phred
(EWING, 1998), Phrap
(PHIL GREEN, University of
Washington) e Consed (GORDON
et al.,
1998). A análise das seqüências foi feita utilizando-se o programa Mega 4 (TAMURA et al., 2007). As
seqüências do marcador SCAR de P. cupira, P. criptica
e P. rustica
apresentaram um nível de identidade de praticamente 100% em relação à
seqüência de P. helleri. Já
em relação à análise de correlação, entre a presença do marcador SCAR e a de
cromossomos extranumerários, foram utilizadas 19, 17,
21 e 11 larvas pós defecantes de quatro colônias de
P. cupira provenientes
de Guimarânia-MG (GUI 1, GUI 2, GUI 3 e GUI 11),
respectivamente. O gânglio cerebral de cada larva foi dissecado para
preparação convencional de cromossomos metafásicos
(IMAI et al., 1988) e o resto da larva foi congelado para a análise do DNA. O DNA dessas larvas
foi extraído (WALDSCHMIDT et al., 1997) e
amplificado utilizando-se os primers SCARs
desenhados por TOSTA (1999). Os fragmentos amplificados foram separados em
gel de agarose 1,2% e corados com brometo de etídeo. Estas análises evidenciaram
que indivíduos de P. cupira das colônias GUI 2 e
GUI 3 apresentaram 2n=34 cromossomos e ausência do marcador SCAR. Por outro
lado, um cromossomo B foi encontrado em 10 indivíduos da colônia GUI 1 e em 3 da GUI 11. Nestes mesmos indivíduos, observou-se
também, o fragmento correspondente ao marcador SCAR. Estes dados reforçam a
hipótese de que os cromossomos B possuem seqüências específicas e que, pelo
menos no gênero Partamona,
estes cromossomos podem ter tido uma origem interspecífica
(TOSTA et al., 2007). Entretanto, estudos
posteriores, envolvendo a análise citogenética de P.
criptica e P. rustica, bem como a utilização de sondas
de FISH oriundas dos próprios cromossomos B de P. helleri
e P. cupira se fazem necessárias para confirmar
esta hipótese. Referencias Bibliográficas: BEUKEBOOM, L. W. (1994). Bewildering
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328-336. BRITO, R. M., POMPOLO, S. G., MARTINS, M. F., BARROS, E.
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TAVARES, M. G. ; FERNANDES, A. ; BARROS, E. G. ; CAMPOS, L. A. O. ; CAMACHO,
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& CAMPOS, L. A. O. (1997). Extraction of genomic
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Braz. J. Genet., 20: 421-423.
Jefferson de Brito Marthe Profª Mara Garcia
Tavares (Orientadora)
Profª Silvia das Graças Pompolo (Co-orientadora) Profª Tânia Maria
Fernandes Salomão (Co-orientadora) |
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