Universidade Federal de Viçosa Programa de Pós Graduação em Genética
e Melhoramento SEMINÁRIO DE TESE Título da tese: Utilização
de técnicas citogenéticas e citométricas
na caracterização do genoma de Coffea arabica e Coffea canephora. Capítulo 3: Mensuramento do conteúdo de DNA de cada cromossomo de Coffea arabica e Coffea canephora por meio da associação de técnicas citogenéticas e citométricas. Prelecionista: Wellington R. Clarindo Orientador: Profo. Carlos Roberto de Carvalho Co-orientadores: Profo. Wagner Campos Otoni Dra. Eveline Teixeira Caixeta O gênero Coffea (família Rubiaceae) possui mais de 80 espécies, das quais se
destacam Coffea arabica L. (2n
= 44) e Coffea canephora Pierre
ex Froehner (2n= 22) em virtude da enorme
relevância econômica e evolutiva. O conteúdo O presente estudo teve como
objetivos: (1) empregar metodologias para obtenção de histogramas com CVs menores que 5%, os quais são
considerados aceitáveis para análises citométricas;
(2) quantificar o tamanho do genoma nuclear de C. arabica L. e C. canephora; (3) mensurar o conteúdo
de DNA de cada cromossomo dessas espécies associando técnicas citogenéticas e citométricas. Inicialmente, o tamanho do
genoma nuclear foi quantificado por meio da citometria
de fluxo, uma ferramenta rápida e adequada para esse fim. A partir da análise
de suspensões nucleares, provenientes de folhas das amostras (C. arabica ou
C. canephora)
e do padrão (tomate – Solanum lycopersicum L.) tratadas
com tampões de extração e coloração nuclear, foram gerados histogramas apresentando
coeficientes de variação entre Lâminas foram preparadas, a
partir de suspensões de agregados celulares de C. arabica e C. canephora citogeneticamente
tratadas, e submetidas à reação de Feulgen. As dez metáfases
com cromossomos sem sobreposições, no mesmo plano de foco e com constrições
bem definidas, foram utilizadas para mensurar a densidade óptica integrada
(DOI). Por meio da distribuição da medida do tamanho do genoma nuclear proporcionalmente
aos valores médios de DOI, o conteúdo de DNA de cada cromossomo de C. arabica e
C. canephora
foi estimado. Em virtude dos cromossomos relativamente
pequenos e morfologicamente similares, muitos autores não identificaram os
pares de homólogos de C. canephora e, especialmente, de C. arabica. Além disso, há relatos de
que essas características têm prejudicado a aplicação de técnicas de
bandeamento e de hibridização in situ, dificultando ainda mais a caracterização
cromossômica dessas espécies. Nesse estudo, as metodologias possibilitaram a
caracterização morfométrica de todos os pares de
cromossomos de C. arabica
e C. canephora
e, conseqüentemente, a montagem do cariograma das
duas espécies. Os resultados, obtidos por meio do desenvolvimento e adaptação
metodológicos, representam uma contribuição na prospecção do genoma do
cafeeiro. Referencial Teórico Carvalho
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___________________________________ Profo. Carlos Roberto de Carvalho Wellington R. Clarindo |