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Programa de Pós Graduação em Genética
e Melhoramento Seminário de Tese INFLUÊNCIA DE
ANTIBIÓTICOS NA MORFOGÊNESE in vitro, TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA E ISOLAMENTO DE RNA DE Bixa orellana L. Estudante: Simone
de M. Rodrigues Orientador: Wagner
Campos Otoni A introdução de genes em Bixa orellana
tem sido almejada, com o objetivo de produzir plantas superiores,
principalmente quanto ao conteúdo de bixina, um
corante natural, produzido por essa espécie, e que vem sendo amplamente
empregado industrialmente (MERCADANTE e PFANDER, 1998; SÃO JOSÉ e REBOUÇAS,
1990). No entanto, o melhoramento clássico tem sido dificultado devido,
principalmente, o conhecimento escasso dos tipos cultivados dessa espécie (CARVALHO
et al.,, 1995). Assim, a
biotecnologia, através da cultura de tecidos, tenta contornar esse problema.
Portanto, os objetivos desse trabalho foram estudar a influência do uso de
antibióticos na morfogênese in vitro e estabelecer um protocolo de transformação
genética e isolamento de RNA para a espécie estudada. Avaliando o uso de
antibióticos utilizados na seleção de plantas transformadas para duas
matrizes de urucum cultivadas em zeatina 4.56 μM (PAIVA NETO et al.,
2003), verificou-se que a inibição morfogênica de explantes
hipocotiledonares submetidos à pré-cultivo e não
pré-cultivados são explicados, por regressão, pelo aumento da concentração de
higromicina, sendo que 100% dessa inibição serão
alcançadas quando se utilizar higromicina 6,25 mg L-1 e higromicina
4,85 mg L-1 para M1 e M6, respectivamente.
Avaliando-se a equação de regressão construída para segmentos radiculares do
tipo cultivado Peruana, concluiu-se que higromicina
2,8 mg L-1 e timetin
300 mg L-1 será capaz de inibir 100% das
brotações para esse tipo cultivado. Também, baixas concentrações do
antibiótico canamicina inibiram a morfogênese para
segmentos de raiz para o tipo Peruana. Portando higromicina,
como agente seletivo, é mais adequado que canamicina,
para a espécie vegetal estudada. O estudo realizado para verificar as respostas
morfogênicas a partir de hipocótilos e raízes de três tipos de urucum, em
diferentes tipos de antibióticos comumente usados na eliminação de bactéria,
indicou que os tratamentos aplicados para hipocótilos não foram superiores ao
controle, promovendo a inibição morfogênica in vitro dos hipocótilos das plantas
analisadas. Segmentos de raízes de B. orellana Bico de Pato, matrizes M1 e M6, e Peruana
foram avaliados de acordo com a qualidade dos antibióticos, encontrando
diferença estatística entre as matrizes do tipo cultivado Bico de Pato e o tipo cultivado Peruano,
o qual apresentou as médias mais baixas para todos os tratamentos, indicando
que a resposta morfogênica dos explantes avaliados
de urucum é genótipo específico. Um sistema eficiente de transformação genética
via Agrobacterium rhizogenes
R1601, carregando a construção quimérica nos-nptII-nos,
foi desenvolvido para urucum. Para os ensaios de transformação
utilizaram-se duas matrizes de urucum, M2 e M6, tendo sido verificado
diferenças na intensidade de respostas entre as matrizes. Condições de
obtenção de brotos foram otimizadas, verificando que
o uso de um pulso de 10 dias em meio de cultivo líquido suplementado com zeatina 4.56 μM, seguido
de cultivo em meio semi-sólido, acelera o calejamento
e surgimento das raízes “hairy root”.
Entretanto, é observado o aparecimento de poucas gemas, em tempo prolongado,
usando meio de cultura desprovido de fitorregulador.
Uma alta eficiência de transformação e regeneração para Bixa orellana foi observada, com
possibilidade de ser utilizado para propagação clonal em larga escala de
tipos cultivados de urucum. Também, o protocolo utilizando MATAB 2% em
solução salina 3M se mostrou eficiente para a obtenção de RNA de urucum,
visto a dificuldade de isolamento de ácidos nucléicos para essa espécie
vegetal, rica em polifenóis e polissacarídeos. REFERÊNCIAS CARVALHO, J.F.R.P.; ROBINSON, I.P.; ALFENAS, A.C. Isozymic variability in a Brazilian collection of annatto (Bixa orellana L.). Pesquisa Agropecuária Brasileira, v. 40, n. 7, p. 653-660, 2005. MERCADANTE, A.Z.; PFANDER, H. Carotenoids from annatto: a review. Recent Research Developments in Agriculture
and Food Chemistry,
v. 2, p. 79-91, 1998. PAIVA-NETO, V.B. MOTA, T.R.; OTONI, W.C. Direct organogenesis from hypocotyls-derived explants of annatto (Bixa orellana). Plant Cell, Tissue and Organ Culture, v. 75, p. 159-167, 2003. SÃO JOSÉ, A.B.; REBOLÇAS, T.N.H. Propagação de urucueiros e plantio. In: A cultura do urucum no Brasil. Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia. Vitória da Conquista-BA, Brasil. 109 p, 1990. ________________________ ________________________ Simone de M. Rodrigues Wagner Campos Otoni (Doutoranda) (Orientador) |
