Universidade Federal de Viçosa Programa de Pós Graduação em Genética
e Melhoramento Seminário de Tese Prelecionista: Janaína de Oliveira Melo (mestranda) Comissão
orientadora: Prof. Sérgio H. Brommonschenkel (orientador) Profa.
Marisa V. Queiroz Prof.
Eduardo S. G. Mizubuti Clonagem
Posicional da Região Genômica de Eucalyptus grandis que
Contém o Gene de Resistência Ppr-1 Espécies
do gênero Eucalyptus
são bastante utilizadas no setor industrial, especialmente na produção de
papel e celulose. Em 2006, as exportações do setor de papel e celulose foram
de US$ 4,0 bilhões e o saldo comercial foi de US$ 2,9 bilhões (Bracelpa, relatório florestal 2007). Uma séria ameaça
para as plantações de Eucalyptus
é a ocorrência da ferrugem causada pelo fungo Puccinia psidii Winter
(Coutinho et al., 1998; Tommerup et al., 2003; Telechea et al., 2003). O patógeno infecta plantas
jovens reduz o crescimento e provoca a morte das mudas para plantio (Carvalho
et al., 1998). A alternativa mais viável para o
controle do patógeno é a
identificação e o plantio de genótipos resistentes à P. psidii. Junghans et al. (2003)
identificaram marcadores moleculares ligados ao gene de resistência à
ferrugem (Ppr1 - Puccinia psidii resistance gene 1) em Eucalyptus grandis. Esses
autores estimaram que o marcador RAPD (AT9/917) fortemente ligado a este gene
localiza-se a, no máximo, Utilizando
marcadores moleculares ligados a Ppr-1
foram identificados três clones BACs
com tamanho estimado de 140 kb (BAC-D11), 150 kb (BAC-C04) e 100 kb (BAC-H10).
Esses clones foram fragmentados por nebulização e
os insertos com média de 2kb foram subclonados em plasmídeos para construção das bibliotecas shotgun. Os plasmídeos recombinantes foram
seqüenciados em ambas as extremidades e as seqüências obtidas foram
depositadas em banco de dados do Laboratório de Genômica-BIOAGRO
e analisadas utilizando o pacote de softwares
Phred/Phrap/Consed (Gordon et al., 1998; Ewing et al., 1998; Ewing & Green, 1998). O processo de anotação dos contíguos das
seqüências foi realizado utilizando as ferramentas disponíveis no site do “National Center for Biotechnlogy Information”
(NCBI, Bethesda, MD, EUA; www.nlm.nih.gov/cgi-bin/BLAST),
SMS (Sequence
Manipulation Suite, http://bioinformatics.org/sms2/)
e GenScan (http://genes.mit.edu/GENSCAN.html). Foram
obtidas 4663, 3612 e 5624 seqüências referentes às
bibliotecas dos clones BAC-H10, BAC-C04 e BAC-D11, respectivamente. A
cobertura seqüenciada permitiu a formação de um contíguo para os BAC-D11 e BAC-C04
e dois contíguos para o BAC-H10. A busca por similaridade realizada no site
NCBI, utilizando o BLASTX, mostrou a existência de 2
análogos de genes de resistência nos BAC-D11 e BAC-H10 e um análogo no BAC-C04.
Além disso, pode-se verificar a presença de elementos retrotransponíveis
entre os genes R. Estão sendo feitas análises para
determinar as ORFs e regiões de junção entre exons e introns de cada análogo
de gene R identificado e estudos para confirmar a localização genômica dos BACs identificados.
Referências CARVALHO, A.O., ALFENAS, A.C., MAFFIA, L.A. & CARMO, M.G.F. (1998). Resistência de espécies, progênies e procedências de Eucalyptus à ferrugem, causada por Puccinia psidii winter. Pesquisa Agropecuária Brasileira, 33: 139-147. COUTINHO, T.A., WINGFIELD,
M.J., ALFENAS, A.C. & CROUS, P.W. (1998). Eucalyptus rust: A disease with the potential
for serious international implications. Plant
Disease, 82: 819-825. GORDON, D., ABAJIAN, C. &
GREEN, P. (1998). Consed:
A graphical tool for sequence finishing. Genome
Research, 8: 195-202. GRATTAPAGLIA, D. & BRADSHAW,
H.D. (1994). Nuclear DNA content of commercially important Eucalyptus species and hybrids. Canadian Journal of JUNGHANS, D.T., ALFENAS, A.C.,
BROMMONSCHENKEL, S.H., ODA, S., MELLO, E.J. & GRATTAPAGLIA, D. (2003).
Resistance to rust (Puccinia psidii Winter) in Eucalyptus:
mode of inherence and mapping of a major gene with RAPD markers. Theoretical and Applied Genetic, 108:
175-180. TELECHEA, N., ROLFO, M., COUTINHO,
T.A. & WINGFIELD, M.J. (2003). Puccinia psidii
on Eucalyptus globulus
in TOMMERUP, I.C., ALFENAS, A.C.
& OLD, K.M. (2003). Guava rust in Brasil – A
threat to Eucalyptus and other Myrtaceae.
Janaína de Oliveira Melo Prof. Sérgio
H. Brommonschenkel (mestranda) (orientador) |